Люминесцентное выявление катехоламинов (КА) и серотонина (С) в тканях осуществляли с помощью метода B. Falck`а и N. Hillarp`а, в модификации Е.М. Крохиной. Люминесцентное выявление гистамина (Г) в тканях осуществляли с помощью метода S. Cross`а, S. Ewen`а, F. Rost`а. Для качественной и количественной характеристики тучных клеток (ТК) срезы кожи обрабатывали полихромным толуидиновым синим по A. Unn`а.

Клинический раздел

Обследовано и пролечено 535 студентов, имеющих вегетативные дисфункции. Все обследованные были разделены на 2 репрезентативные группы: основную (415 студентов) и сравнения (120 студентов).

Основная группа (ОГ). Студенты ОГ проходили обследование и восстановительную коррекцию по предложенной нами методике компьютерной рефлексотерапии. Средний возраст студентов составил 22,7±0,5 года (от 16 до 32 лет). Средняя длительность ВД составляла 3,4±0,2 года (от 1 года до 6 лет). В ОГ было 322 (77,6%) женщины и 93 (22,4%) мужчины. У 158 (38%)студентов была зафиксирована ВД с преимущественным поражением сердечно-сосудистой системы (ССС), у 141 (34%) – с вовлечением в процесс желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), у 71 (17%) – дыхательной системы (ДС) и у 45 (11%) – смешанная форма ВД.

Группа сравнения (ГС). Студенты ГС получали лечение ВД стандартными методами, с использованием медикаментозной терапии (бета-блокаторы, препараты бензодиазепинового ряда, антидепрессанты, ноотропы, сосудистые препараты, спазмолитики, ферментативные препараты и др.), физиобальнеолечения (хвойно-жемчужные, йодо-бромные ванны, магнитотерапия, СМТ- терапия, электросон и др.) (Парцирняк С.А, Юнацкевич П.И., 2002; Вейн А.М., 2003; Стрелкова Н.И., 2005). Обследование и динамическое наблюдение за ГС осуществлялось аналогично ОГ. Средний возраст пациентов составил 24,5±0,6 лет (от 16 до 33 лет), давность ВД – 2,6±0,3 года, от 6 мес. до 6 лет. Среди ГС было 88 (73,3%) женщин и 32 (26,7%) мужчины. У 47 (39,2%) студентов была зафиксирована ВД с преимущественным поражением ССС, у 39 (32,5%) с вовлечением в процесс ЖКТ, у 21 (17,5%) – ДС и у 13 (10,8%) – смешанная форма ВД.

Для постановки диагноза ВД и оценки типа нарушений (дисфункция ССС, дисфункция ЖКТ или ДС) использовались диагностические критерии, разработанные А.М. Вейном, А.Д. Соловьевой, О.А. Колосовой (1981), А.М. Вейном, Г.Р. Табеевой, Н.Н. Яхно (1986), А.М. Вейном с соавт. (2003).

Методы исследования

Всем студентам проводили общеклиническое обследование, включающее изучение анамнеза, физическое, лабораторное и инструментальное обследование, консультации невролога, при необходимости – окулиста и других специалистов. Принципы исследования ВНС основывались на клинико-экспериментальном подходе, сущность которого составляли функционально-динамические исследования вегетативного тонуса (ВТ), вегетативной реактивности (ВР), и вегетативного обеспечения деятельности (ВОД) (Вейн А.М., 2003). Психодиагностика проводилась с использованием тестов СМОЛ, Спилбергера STAI, Теста Межличностных Отношений (ТМО), Шкалы Депрессии Бека (Зайцев В.П., 1981, 2004; Вассерман Л.И., Щелкова О.Ю., 2004; Прохоров В.О., 2004).

Лабораторное обследование включало: общий анализ крови с оценкой адаптационных реакций организма (Гаркави Л.Х., Квакина Е.Б., Кузьменко Т.С., 1998); метаболическое тестирование с определением натощаковой гликемии методом цветной реакции с ортотолуидиновым реактивом, мочевой кислоты (МК) – методом прямой спектрофотометрии и липидного спектра крови с использованием реактивов «Ольвекс диагностикум»; определение гормонов щитовидной железы – трийодтиронина, тироксина, тиреотропного гормона, антител к тиреоглобулину (АТ к ТГ) методом твердофазного иммуноферментного анализа; кортизола крови – методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием набора реагентов «Стероид ИФА-кортизол 01»; уровня в крови иммуноглобулинов А, М, G – методом одномерной радиальной иммунодиффузии, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови – с использованием реагентов «Микроанализ ЦИК»; железа и общей железосвязывающей способности сыворотки (ОЖСС), электролитов крови (калия, натрия, кальция, магния) – колориметрическим методом с использованием реактивов «Ольвекс диагностикум»; определение уровня в периферической крови пациентов КА, С, Г гистохимическими методами, идентичными вышеописанным методам определения КА, С, Г в тканях.

Инструментальное обследование включало: электрокардиографическое исследование стандартным методом в 12-ти отведениях в покое; реоэнцефалографию (РЭГ), реовазографию (РВГ) сосудов нижних конечностей на аппаратно-программной диагностической системе «Валента»; тепловизионное исследование нижних конечностей на тепловизионном комплексе «Радуга – 5».

Дополнительное обследование: общий анализ мочи, биохимические анализы крови с определением билирубина и его фракций, трансаминаз, щелочной фосфатазы, С-реактивного белка, креатинина, общего белка и его фракций, протромбинового индекса, иммуноглобулинов Е, антистрептолизина О, офтальмоскопия глазного дна, допплеровское исследование сосудов головы, верхних и нижних конечностей, суточное мониторирование электрокардиографии по Холтеру с исследованием вариабельности сердечного ритма, велоэргометрия, с оценкой толерантности к физической нагрузке, исследование функции внешнего дыхания, электроэнцефалография, рентгенологическое обследование органов грудной клетки и брюшной полости, ультразвуковое исследование сердца, аорты, органов брюшной полости и малого таза, фиброгастродуоденоскопия и др.

Специальное рефлексодиагностическое обследование включало: иридодиагностику, аурикулодиагностику, модифицированные тесты Акабане и Накатани, измерение электрических параметров ТА, диагностику по методу Фолля, которые проводились на аппаратно-программном комплексе «У-син».

Эффективность проводимого лечения учитывали на основании анализа субъективных и объективных показателей.

Статистический анализ

Статистическую обработку результатов исследования осуществляли в соответствии с принципами доказательной медицины и рекомендациями ведущих ученых (Славин М.Б., 1989; Гланц С., 1999; Зайцев В.М., Лифляндский В.Г., Маринкин В.И., 2006; Реброва О.Ю., 2006). В работе использованы методы параметрического и непараметрического анализов.

Определяли и учитывали традиционные показатели описательной статистики: число наблюдений (n), среднее арифметическое (М), стандартное отклонение (?), стандартная ошибка среднего арифметического (m), минимальное и максимальное значение изучаемого признака, относительные величины (%) и их ошибки. При сравнении двух выборок применяли t-критерий Стьюдента, если имело место, так называемое, неправильное распределение, то оценивали критерии Манна - Уитни или Вилкоксона. При сравнительном анализе относительных показателей (в %) использовали t-критерий для относительных величин, точный критерий Фишера, а также критерий «кси-квадрат» (?2). Различия между выборками считали статистически значимыми при р<0,05. Для количественной характеристики связи между показателями вычисляли коэффициент линейной (по Пирсону) и ранговой (по Спирмену) корреляции – r. Значения r, принимали как статистически значимые при их р<0,05. Для более детального суждения о динамике исследуемых показателей за конкретный период наблюдения (в процессе лечения) вычисляли интегративные показатели их динамики (ипд) по формуле, предложенной И.В. Мадяновым с соавт.(1995):

где А и В - значения конечного и исходного результатов соответственно.

Статистический анализ работы выполнен на персональном компьютере с использованием разработанных для этого класса задач статистических программ Microsoft Ехсе1 и Statistica for Windows 6.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Локализация и уровень трансмиттеров в ТА у интактных крыс

В результате проведения экспериментальных исследований на крысах с использованием гистохимических методов было установлено, что КА, С, Г присутствовали во всех слоях кожи (эпидермис, сосочковый и сетчатый слои, гиподерма) и тучных клетках. Однако, распределение их было неравномерным, как по слоям кожи в области ТА, так и в зависимости от локализации точки на теле животного. Установлено, что максимальное количество КА, С, Г содержится в норме в эпидермисе и в сетчатом слое кожи. Так в эпидермисе в области точки TR20 уровень КА составлял 7,2±0,8 у.е., а в сосочковом слое 3,6±0,6 у.е. и в гиподерме 1,3±0,6 у.е, р<0,05 для обоих сравнений, уровень С в эпидермисе был 11,4±1,2 у.е., в сравнении с 5,7±0,6 у.е. и 2,7±0,5 у.е. соответственно, р<0,05 для обоих сравнений, уровень Г в эпидермисе составлял 14,5±1,2 у.е. в сравнении с 10,5±1,3 у.е. и 9,0±2,1 у.е. соответственно, р<0,05 для обоих сравнений. В сосочковом слое в F13 и Е36 уровень Г был статистически достоверно ниже, чем в эпидермисе: 12,3±1,4 у.е. против 19,1±1,2 у.е. и 7,5±1,1 у.е. против 12,8±1,2 у.е. соответственно, p<0,05 для обоих сравнений. В сетчатом слое содержалось максимальное количество Г: в области точки TR20 — 20,2±2,4 у.е. в сравнении с сосочковым слоем – 10,5±1,3 у.е., и с 9,0±2,1 у.е. в гиподерме, p<0,05 для обоих сравнений, в Е36 — 16,8±2,2 у.е., в сравнении с сосочковым слоем – 7,5±1,1 у.е., и с 8,0±1,8 у.е. в гиподерме, p<0,05 для обоих сравнений. Также в области TR20 в сетчатом слое содержание КА и С было достоверно выше, чем в гиподерме: 4,6±0,9 у.е. в сравнении с 1,3±0,6 у.е., и 7,3±0,8 у.е. в сравнении с 2,7±0,5 у.е., соответственно, p<0,05 для обоих сравнений. Это свидетельствует о большой биологической значимости именно эпидермиса и сетчатого слоя кожи. Более глубоко залегающий слой – гиподерма также содержит трансмиттеры, но в значительно меньшей концентрации. Так Г она содержала в 2 раза меньше, чем в сетчатом слое во всех изучаемых ТА. Содержание КА и С по сравнению с сетчатым слоем снижено в 1,5-2 раза. Уровень Г, КА и С в гиподерме в области ТА статистически не отличался от уровня их содержания в гиподерме вне ТА.

Были установлены отличия содержания трансмиттеров в ТА и вне ее: так уровни КА и С в эпидермисе в точке Е36 статистически достоверно превышали таковые вне ТА (2,4±0,3 у.е. и 5,4±0,2 у.е. против 1,8±0,3 у.е. и 3,3±0,5 у.е., р<0,05 для обоих сравнений), уровень Г в эпидермисе TR20 так же достоверно отличался от контроля вне ТА: 14,5±1,2 у.е. против 10,9±1,5 у.е., р<0,05.

Так же нами было установлено, что ТА статистически достоверно отличаются по трансмиттерному составу между собой: в эпидермисе точки F13 уровень Г статистически достоверно отличался от такового в области точек TR20 и Е36 (19,1±1,2 у.е. в сравнении с 14,5±1,2 у.е. и 12,8±1,2 у.е. соответственно, р<0,05 для обоих сравнений), а в эпидермисе точки TR20 уровни КА (7,2±0,8 у.е.) и С (11,4±1,2 у.е.) статистически значимо отличались от соответствующих уровней в F13 (1,8±0,6 у.е. и 3,3±0,6 у.е., р<0,05 для обоих сравнений) и в Е36 (2,4±0,3 у.е. и 5,4±0,2 у.е., р<0,05 для обоих сравнений).

По данным ряда авторов в реализации первичного механизма акупунктурного эффекта участвуют ТК (Вержбицкая Н.И., Кромин А.А., 1981; Яблонцев Н.Н., 1983; Deng Y. at al., 1996). Нами установлено, что ТК статистически чаще выявляются в области ТА, чем вне их. Так в эпидермисе точки TR20 в поле зрения в среднем определялось 16,5±2,1 ТК, а вне точки – 10,6±1,1 ТК, р<0,05. Уровни КА, С в ТК практически во всех случаях превышали их уровни в других слоях кожи, за исключением эпидермиса, в котором имелась тенденция к более высокому содержанию данных трансмиттеров, в отличие от уровня Г, который в ТК имел тенденцию к превышению такового во всех других слоях кожи.

Состояние трансмиттеров и электрокожного сопротивления в точках акупунктуры при токсическом повреждении поджелудочной железы в эксперименте

Было установлено, что на 5 сутки после введения аллоксана во всех изучаемых ТА наблюдается схожая динамика изменений экстранейрональных трансмиттеров, более выраженная в ТА F13, которая является точкой «тревоги» пораженного органа – поджелудочной железы. В эпидермисе, в сосочковом и сетчатом слоях кожи в области точек акупунктуры статистически достоверно увеличивались уровни Г, КА, С. Данные проиллюстрированы на рис. 1.

. Динамика уровней трансмиттеров в структурах кожи крыс в области ТА на 5, 10, 15 сутки после введения аллоксана, у.е.

При измерении ЭКС в данных точках на 5-й день после введения органного яда было зафиксировано снижение ЭКС по сравнению с исходным уровнем в среднем с 61,9±1,2 кОм до 45,7±1,4 кОм, р<0,05, при этом в большей степени оно снизилось в F13. На 10 день после введения животным яда в ТА наблюдалось снижение уровней трансмиттеров, причем, Г снизился ниже исходного уровня, а КА и С, в основном, до исходного уровня. ЭКС в изучаемых ТА на 10 сутки достигло исходного значения (от 58,5 до 65,3 кОм). Значительное снижение уровня трансмиттеров во всех слоях ТА на 10 день эксперимента мы связываем с длительной и непрерывной висцерокутанной импульсацией и истощением механизмов самовосстановления. К 15 дню эксперимента уровень трансмиттеров в области ТА продолжал снижаться во всех изучаемых ТА. В то же время, ЭКС во всех ТА к 15 дню эксперимента повысилось и статистически значимо превысило величину ЭКС кожных покровов вне ТА(138,9±2,1 кОм) и составило в среднем 155,6±2,3 кОм. Таким образом, ТА в условиях хронического токсического поражения органа превратились в точки-изоляторы и через них на 15 день эксперимента уже не проходил физиологический ток. При изучении уровня содержания биоаминов по всем слоям кожи в проекции ТА у крыс из группы сравнения нами не было обнаружено каких-либо статистически значимых отличий по содержанию Г, КА и С по дням эксперимента.

При проведении анализа по методу Спирмена были установлены корреляционные связи между ЭКС и уровнем трансмиттеров в области ТА: так в области точки F13 выявлялись сильные отрицательные корреляционные связи между ЭКС и уровнем Г в эпидермисе (r = – 0,76, р<0,05) и в тучных клетках (r=– 0,77, р<0,05), между ЭКС и уровнем С в сосочковом (r = –0,77, р<0,05) и сетчатом (r = – 0,79, р<0,05) слоях дермы, в ТК (r = –0,8, р<0,05), а так же между ЭКС и уровнем КА – умеренные отрицательные корреляционные связи в сосочковым (r = – 0,58, р<0,05), и сетчатом (r = – 0,52, р<0,05) слоях.

Установленная нами динамика экстранейрональных трансмиттеров и ЭКС в ТА, свидетельствует о значительном влиянии на ТА патологической импульсации с пораженного органа, и о том, что эта реакция имеет общий, влияющий на весь организм, и локальный компоненты. Наиболее выраженные изменения состава, уровней трансмиттеров и ЭКС наблюдались в ТА F13, имеющей прямую висцерокутанную связь с пораженным органом (поджелудочной железой).

Т.о., нами впервые вскрыты механизмы формирования электроаномальности ТА, установлена зависимость исходного ЭКС и его последующая динамика от уровня содержания Г, КА, С в слоях кожи и в ТК в области ТА. Выявленные закономерности позволяют использовать ЭКС, для оценки функционального состояния органа, связанного с определенными ТА.

Состояние и динамика трансмиттеров в структурах гипоталамуса крыс на фоне однократного и курсового воздействия иглоукалыванием

Установлено, что в ответ на однократную процедуру иглорефлексотерапии (ИРТ) в точку TR20 у экспериментальных крыс в течении 10 минут наблюдалось достоверное снижение уровней всех изучаемых трансмиттеров (Г, КА, С), как в медиобазальном поле (МБП), так и в заднем поле (ЗП) гипоталамуса. При проведении 20- минутного иглоукалывания в точку TR20 нами было прослежено дальнейшее снижение уровня трансмиттеров в МБП и ЗП гипоталамуса, т.о., было установлено, что однократная процедура ИРТ способствует статистически значимому снижению уровня изучаемых трансмиттеров в МБП и ЗП гипоталамуса, причем, чем дольше идет воздействие иглой на ТА, тем меньше становится уровень трансмиттеров в структурах гипоталамуса крыс (см. табл.1).

Данные факты дают нам возможность высказать предположение, что в ответ на акупунктурное воздействие увеличивается чувствительность структур гипоталамуса за счет освобождения их от биогенных аминов. В группе сравнения, где воздействие осуществлялось вне ТА, достоверного изменения уровней трансмиттеров не отмечалось.

Таблица 1

Содержание трансмиттеров в гипоталамусе крыс до и после 20-ти минутного иглоукалывания в точку TR20, у.е., M±m

Трансмиттеры Группа Медиобазальное поле Заднее поле

До ИРТ После ИРТ Достоверность отличий, p< До ИРТ После ИРТ Достоверность отличий, p<

Катехоламины опытная 46,2 ± 3,8 15,2 ± 2,8 0,001 39,4 ± 3,1 14,2 ± 1,8 0,05

сравнения 46,7± 2,9 40,6± 2,2 – 40,3± 2,5 38,6± 1,7 –