Delist.ru

Клинико-прогностическое значение оценки функционально-метаболической активности лейкоцитов, среднемолекулярных пептидов, системы проантиоксидантной защиты крови у больных ВИЧ-инфекцией (30.08.2007)

Автор: Сабанчиева Жанета Хусейновна

выявить состояние фагоцитарно-метаболической функции лейкоцитов с помощью проведения спонтанного НСТ-теста;

установить значение уровня среднемолекулярных пептидов в плазме крови как показателя эндогенной интоксикации, диагностического, прогностического критерия в зависимости от стадии, степени тяжести патологического процесса, наличия наркомании, ко-инфекции и сопутствующих заболеваний и осложнений;

исследовать содержание перекисного окисления липидов плазмы крови;

выявить закономерность изменений антиоксидантной системы крови в зависимости от стадии, степени тяжести патологического процесса, наличия наркомании, ко-инфекции и сопутствующих заболеваний;

провести сопоставление между цитохимическими показателями лейкоцитов, среднемолекулярых пептидов, свободнорадикальных систем крови и основными параметрами лабораторного исследования крови (количество лейкоцитов, палочкоядерный сдвиг, СОЭ), а также выявить корреляционную связь с основными показателями иммунной системы (CD4-, CD8-лимфоцитов, CD4/CD8)

установить диагностическую и прогностическую информативность полученных показателей функционально-метаболической активности лейкоцитов, среднемолекулярных пептидов в плазме крови и про-антиоксидантных систем крови;

обосновать и оценить эффективность лечения у больных ВИЧ-инфекцией с применением в комплексной терапии иммуномодулирующего, противовоспалительного и антиоксидантного препарата – тамерит.

Работа проводилась в соответствии с комплексным планом НИР Кабардино-Балкарского государственного университета Минобразования РФ по программе «Университеты России», раздел II «Медицина». Тема: «Изучение показателей микробицидной системы лейкоцитов и среднемолекулярных пептидов в плазме крови организма в норме и при инфекционных заболеваниях различной этиологии», зарегистрирована в ВНТИ-центре, государственная регистрация № 01.9.50003849, а также по проблеме «Состояние прооксидантной и антиоксидантной системы организма при инфекционных заболеваниях различной этиологии и методы ее коррекции». Номер государственной регистрации во ВНТИ-центре 0120.0 501781.

Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые при ВИЧ-инфекции установлено закономерное угнетение активности миелопероксидазы лейкоцитов, содержания катионного белка и липидов в цитоплазме нейтрофильных гранулоцитов при одновременном возрастании активности щелочной и кислой фосфатаз, а также уровня гликогена в нейтрофильных лейкоцитах и возрастание показателя НСТ-теста у больных ВИЧ-инфекцией. Впервые у больных ВИЧ-инфекцией выявлено закономерное возрастание средних молекул в плазме крови с максимальным значением в стадию вторичных заболеваний. Обнаружена активация процессов перекисного окисления липидов на фоне истощения антиоксидантной защиты организма у больных ВИЧ-инфекцией. Установлена патогенетическая значимость изменения малонового диальдегида, церулоплазмина, общей антиокислительной активности, супероксиддисмутазы и каталазы эритроцитов у больных ВИЧ-инфекцией. Получена зависимость выраженности сдвигов функционально-метаболической активности нейтрофилов, состояния среднемолекулярных пептидов и про-антиоксидантных систем крови в зависимости от стадии, степени тяжести патологического процесса, наличия наркомании, ко-инфекций и сопутствующих хронических воспалительных заболеваний, а также от полноты лечебных мероприятий. Впервые апробирована эффективность применения иммуномодулирующего, противовоспалительного и антиоксидантного действия препарата тамерита в процессе терапии ВИЧ-инфекции.

Практическая значимость. Цитохимическое определение интралейкоцитарных компонентов и показателя спонтанного НСТ-теста может служить самостоятельным критерием состояния неспецифической резистентности организма, определяющим степень тяжести воспалительного процесса у больных ВИЧ-инфекцией, прогнозирование осложнений и возможного неблагоприятного исхода заболевания. Значительно выраженные изменения уровня среднемолекулярных пептидов в плазме крови, как показателя эндогенной интоксикации свидетельствует о тяжелом течении болезни, возможном присоединении осложнений или возникновении новых очагов воспаления. Впервые проведено комплексное исследование показателей перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты крови больных ВИЧ-инфекцией в зависимости от стадии, глубины патологического процесса, наличия наркомании, ко-инфекции и при обострении сопутствующих заболеваний. Обнаружена активация процессов перекисного окисления липидов на фоне истощения антиоксидантной защиты организма у больных ВИЧ-инфекцией. Впервые установлен и предложен эффективный иммуномодулирующий, противовоспалительный и антиоксидантный препарат тамерит в лечении ВИЧ-инфекции.

Положения, выносимые на защиту:

В динамике заболевания у больных ВИЧ-инфекцией наблюдаются закономерные сдвиги основных компонентов вирулоцидной системы лейкоцитов, зависящие от стадии, степени тяжести патологического процесса, наличия наркомании, ко-инфекций и сопутствующих хронических воспалительных заболеваний, а также от полноты лечения, что имеет дополнительное клинико-диагностическое значение.

Проведение исследований спонтанного НСТ-теста у больных ВИЧ-инфекцией дает информацию о состоянии функционально-метаболической активности лейкоцитов и может служить критерием нарушения фагоцитарной функции, а также для оценки прооксидантной системы организма. У больных с ВИЧ-инфекцией изменения функционально-метаболической активности лейкоцитов носят неспецифический характер, являясь объективным критерием состояния резистентности организма.

Выраженность изменений средних молекул в плазме крови зависит от стадии, наличия наркомании, ко-инфекции и сопутствующей патологии и может быть использован в качестве дополнительного критерия тяжести процесса, прогноза развития тяжелых форм заболевания, присоединения осложнений, а также в качестве критерия эффективности лечения.

В динамике заболевания у больных ВИЧ-инфекцией происходит повышение активности перекисного окисления липидов, зависящие от стадии, степени тяжести патологического процесса, наличия наркомании, ко-инфекций и сопутствующих хронических воспалительных заболеваний.

Изученные показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты организма при ВИЧ-инфекции можно использовать в качестве дополнительного критерия тяжести процесса, прогноза развития осложнений, а также от полноты лечения, что имеет дополнительное клинико-диагностическое значение.

Возможность использования иммуномодулирующего, противовоспалительного и антиоксидантного препарата тамерита у больных ВИЧ-инфекцией в комплексной терапии.

Внедрение в практику.

Материалы диссертационной работы внедрены в практику работы Центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями МЗ КБР. Результаты диссертационной работы используются в учебном процессе кафедр инфекционных болезней, микробиологии, вирусологии и иммунобиологии, дерматовенерологии, факультетской и госпитальной терапии медицинского факультета КБГУ при прохождении тем: «Инфекция и инфекционный процесс», «ВИЧ-инфекция», «Неспецифическая реактивность и иммунитет».

Публикации: По материалам диссертационной работы опубликовано 56 научных работ, в том числе 1 монография , 6 статей в центральных ВАКовских журналах: «Инфекционные болезни», «Эпидемиология и инфекционные болезни» и «Аллергология и иммунология» и 10 работ на конференциях с международным участием.

Апробация диссертационного материала: основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных итоговых научных конференциях сотрудников и молодых ученых Кабардино-Балкарского госуниверситета (г. Нальчик, 2004-2007), на заседаниях Кабардино-Балкарского научного общества инфекционистов (г. Нальчик, 2005, 2006), на Российской научно-практической конференции Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004), на VI Общероссийской научной конференции с международным участием «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Кисловодск, 2005), на II и III международных конференциях молодых ученых и специалистов (Турция, 2005; Тунис, 2005), на Российской научной конференции «Диагностика, терапия, профилактика социальнозначимых заболеваний человека» (Иркутск, 2005г.), на VI Общероссийской научной конференции с международным участием «Успехи современного естествознания» (Догомыс, Сочи, 2005), на IV Российской конференции «Проблемы морфологии. Теоретические и клинические аспекты» (Астрахань, 2005), на научной конференции «Современные наукоемкие технологии» (о.Тенерифе, 2005), на III международной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Греция, 2005), на юбилейной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2005), на Российской научно-практической конференции посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней (Санкт-Петербург, 2006), на Международной научно-практической конференции «Сепсис: проблемы диагностики, терапии и профилактики» (Харьков, 2006), на V-й межвузовской международной биохимической научно-практической конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2006)., на II-ой региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии Юга России (г. Майкоп, 2006), на Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива - 2006», «Перспектива - 2007», (Приэльбрусье, 2006, 2007), на 6-м Российском съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2006), на VII Российском съезде инфекционистов (Нижний Новгород, 2006), на V-м Всемирном конгрессе по иммунопатологии (Москва, 2007), на юбилейной Российской научно-практической конференции с международным участием, посвященная 175-летию со дня рождения С.П. Боткина (Санкт-Петербург, 2007). Диссертационная работа апробирована на научной конференции кафедр инфекционных болезней, дерматовенералогии, микробиологии вирусологии и иммунобиологии и кафедры последипломного образования, с врачами Республиканского центра по профилактике и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями МЗ КБР (г. Нальчик, 26 июня 2007г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 247 страницах машинописного текста и содержит: введение, 7 глав, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 276 отечественных и 144 иностранных авторов. Иллюстрации представлены 87 таблицами, 30 рисунками и 10 примерами из клинических наблюдений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Клинико-лабораторная характеристика больных. За период с 2000-2006гг. под наблюдением находилось 123 больных ВИЧ-инфекцией находившихся на стационарном лечении и диспансерном учете поликлинического отделения Центра по профилактике и борьбы со СПИД и инфекционными заболеваниями Кабардино-Балкарской Республики г. Нальчика и во 2-ой городской инфекционной больнице г. Краснодара, а также госпитализированных в стационаре. Среди пациентов было 82 мужчин и 41 женщин. Средний возраст больных составил 33,5 года. У ВИЧ-инфицированных диагноз выставлен на основании эпидемиологических, клинических данных и был подтвержден обнаружением в крови специфических антител к белкам вируса иммунодефицита человека I типа методами иммуноферментного анализа (Эколаб Вероностика IV) и иммунного блотинга (NEWLAV BLOT I). В группе больных с половым путем заражения было 34 женщины (27,6%) и 26 мужчин (21,1%). Группу пациентов с парентеральным путем заражения составили 52 мужчин (42,2%) и 11 женщин (8,9%). Парентеральный путь заражения регистрировался с частотой 51,2%, при этом значительный удельный вес составили инфицированные парентерально при внутривенном употреблении наркотиков (48,7% от всех пациентов). В данной группе больные продолжали вводить наркотические препараты, поэтому данную группу больных мы рассматривали как влияние ко-фактора наркомании на ВИЧ-инфекцию.

Заболевание диагностировалось на различных стадиях болезни, но у большинства больных (69,9%) ВИЧ-инфекция выявлялась в стадию первичных проявлений (IIБ, IIВ). Согласно клинической классификации В.И. Покровского (2001) у 49 больных была диагностирована стадия первичных проявлений 2Б (острая ВИЧ-инфекция без вторичных заболеваний), у 37 стадия 2В (острая ВИЧ-инфекция с вторичными заболеваниями) и у 37 пациентов стадия 3 (латентная). За период наблюдения из 123 человек у 73 отмечалось прогрессирование инфекционного процесса, утяжеление общего состояния и переход в стадию вторичных заболеваний. Так, 4А стадия выявлена у 34 больных, 4Б стадия у 20 и 4В у 19 больных. При углубленном изучении стадии вторичных заболеваний установлены следующие СПИД-маркерные заболевания: распространенная герпетическая инфекция 1 и 2 типа у 47 пациентов, кандидоз слизистых полости рта, пищевода– у 10 пациентов, криптоспоридиоз с диарейным синдромом – у 7, генерализованная цитомегаловирусная инфекция у 4, волосатая лейкоплакия языка у 2, саркома Капоши у одного больного, туберкулезный сепсис с поражением легких, лимфоузлов, печени, селезенки - у 4. Кроме того, у 24 пациентов наблюдалась ВИЧ-кахексия с потерей массы тела на 33,0%, пневмония бактериальной этиологии – у 19 больных, частые острые респираторные вирусные инфекции – у 18, повторные бронхиты бактериальной этиологии - у 10, себорейный дерматит - у 8, периферическая полинейропатия – у 11, фурункулез кожи – у 9, стептодермия – у 8 пациентов. У больных ВИЧ-инфекцией выявлены следующие отягощающие заболевания: сифилис (9,7%), хронический алкоголизм (14,6%), наркомания (48,7%), что может, объясняется их социальным образом жизни обследуемых больных.

В соответствии с целями и задачами настоящей работы больные обследовались в динамике заболевания и делились на периоды: I- период включал 86 больных в нее вошли больные в стадию первичных проявлений (IIБ, IIВ); II-й период составили 77 больных у которых диагностирована латентная стадия; III-й период составили 73 человек, у которых развилась стадия вторичных заболеваний; IV-й и V-й периоды через 1 и 6 месяцев от начала базис-терапии.

Больные ВИЧ-инфекцией получали базис-терапию, которая включала антиретровирусную, антибактериальную, дезинтоксикационную терапию, витоминотерапию и симптоматическую. В качестве антиретровирусной терапии ВИЧ-инфицированным в стадию вторичных проявлений, применяли отечественный препарат тимозид (Азидотимидин, АЗТ, Россия) по 0,6 г в сутки в течение 3 месяцев; битерапию 20 больным (тимозид+невирапин по 0,2 г 1 раз в день) и тритерапию 4 больным (тимозид+невирапин+видекс по 0,2 г 2 раза в день). Критериями эффективности лечения являлось клиническое улучшение, повышение CD4-лимфоцитов и снижение РНК ВИЧ. Группе больным из 25 человек помимо базис-терапии проведено противовоспалительное и иммуномодулирующее лечение с помощью нового иммуностимулятора «Тамерит» из группы аминофталгидрозидов.

Среди обследованных 123 пациентов у 67 ВИЧ-инфекция протекала при ко-инфекции парентеральных вирусных гепатитов В, С и микст В+С. Диагноз устанавливался на основании эпидемиологического анамнеза, клинических данных (наличие симптомокомплекса хронического гепатита, увеличение и уплотнение печени), результатов биохимических-серорлогических исследований (пигментные, ферментные, белковые тесты) и при выявлении маркеров HCV, HBV методом ИФА. С учетом клинико-биохимической характеристики, серологического профиля у 29 больных зарегистрирована латентная фаза хронических гепатитов, а у 38 – фаза репликации. Начало наблюдения в I группе больных с парентеральными вирусными гепатитами совпало с выявлением ВИЧ-инфекции.

Среди 123 пациентов у 36 ВИЧ-инфекция протекала при ко-инфекции ВИЧ и туберкулеза. Было выделено 2 группы больных: I-у группу больных составили 17 человек, у которых заболевание туберкулеза было выявлено до ВИЧ-инфицирования; II-ую группу -19 человек, составили больные, где ВИЧ-инфекция предшествовала туберкулезу. Диагноз туберкулеза основывался на клинико-рентгенологических данных, бактериологически подтвержден у 26 больных. Туберкулез выявлялся часто с поражением органов дыхания: инфильтративный туберкулез был выявлен у 4 человек (11,1%); очаговый туберкулез — у 6 человек (16,7%); фибринозно-кавернозный - у 3 (8,3%); кавернозный — у 2 (5,5%); туберкулома — у 1 (2,8%); диссеминированный туберкулез — у 3 (8,3%); генерализованный туберкулез — у 1 больного (2,8%). У 17 больных (15 мужчин и 2 женщин в возрасте от 19 до 49 лет) развился туберкулез легких с осложнениями, такими, как экссудативный плеврит (15) или абсцесс (2). Для проведения клинико-лабораторных исследований под наблюдение была взята I-я группа больных, у которых туберкулез был выявлен до ВИЧ-инфекции и расценивался как сопутствующая инфекция.

Методы исследования. Для решения поставленных в работе задач нами использовались следующие методы исследования:

Активность миелопероксидазы определяли, используя метод Sato (1928),

Активность кислой фосфатазы – реакция азосочетания по Goldberg и Barka (1962) в модификации В.И. Дудецкого (1970),

Активность щелочной фосфатазы определяли с использованием варианта метода азосочетания, предложенного М.Г. Шубич (1965),

Содержания катионного белка проводилось по методу М.Г. Шубича (1974) в прописи Б.С. Нагоева (1983),

Содержание гликогена определяли по А.Л. Шабадашу (1947) с применением реактива Шиффа,

Содержание липидов определяли суданом III по методу Гольдмана по прописи Г.И. Раскина и Л.Б. Левинсона (1957),

Для изучения активности нейтрофильных лейкоцитов был использован тест спонтанного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) по методике Stuart с соавторами (1975) в модификации Б.С. Нагоева (1983),

Содержание среднемолекулярных пептидов в плазме крови скриниговым методом по В.В. Николайчику с соавт. (1991) в модификации М.И. Габриловича (1998).

Уровень малонового диальдегида оценивали по Ushiyma M. at al (1983) в реакции с тиобарбитуровой кислой,

загрузка...