Для определения наличия генов sea, seb, sec была разработана мультиплексная ПЦР с использованием наборов праймеров, предложенных Mehrotra M., Wang G., and Johnson W.M. (2000). Идентификацию гена tst проводили дополнительно.

Амплификацию вариабельного фрагмента гена spa проводили с использованием праймеров, предложенных Shopsin B. et al. (1999) и Koreen L. et al. (2004).

Выделение из геля и последующую очистку продуктов амплификации генов соа и spa проводили с использованием набора фирмы “Amersham Formacia Biotech” в соответствии с инструкцией производителя.

Секвенирование выполнили на секвенаторе фирмы “Amersham Formacia Biotech” ALFexpress II®.

Для амплификации 15 различных генетических локусов золотистого стафилококка были разработаны 2 основные программы и две дополнительные программы для амплификации генетических локусов, которые в дальнейшем подвергались секвенированию.

В работе использовали описательно-оценочный методический подход эпидемиологического анализа. Статистическую обработку результатов проводили с использованием программы StаtCals и таблиц биномиального распределения (Ю.Тюрин, А.Макаров, 2003).

Результаты исследований и их обсуждение

Значение MRSA как возбудителей внутрибольничных инфекций в стационарах РФ

Одной из первостепенных задач настоящего исследования являлось изучение распространенности метициллинрезистентных Staphylococcus aureus в стационарах различных регионов РФ и определение их этиологической значимости в развитии различных форм внутрибольничной инфекции.

Устойчивые к оксациллину изоляты S.aureus были идентифицированы в 15 из 23 стационаров (табл.2). Частота выделения MRSA колебалась от 0,06 % до 80 %. Наибольшая частота выделения MRSA отмечалась в стационарах Москвы и Санкт-Петербурга. Вместе с тем, в ряде стационаров, расположенных в крупных городах Южного, Сибирского и Приволжского регионов России MRSA выявлены не были. Доля устойчивых к оксациллину среди всех изученных изолятов S.aureus составила 27,68 %. Она превысила частоту выделения MRSA в стационарах стран центральной Европы и, тем более, в лечебных учреждениях Скандинавских стран. (При расчете исключили изоляты S.aureus, выделенные в Дорожной больнице г. Санкт-Петербурга, т.к. среди S.aureus, выделенных в этом стационаре, MRSA обнаружили только у одного носителя из контингента медицинских работников).

Результаты статистической обработки результатов выявили наличие достоверных различий в частоте выделения MRSA в многопрофильных стационарах Москвы (P=0,000349). Частота выделения MRSA в клиниках ВМА военно-полевой терапии, лор- и глазной была достоверно ниже по сравнению с клиниками хирургического профиля (P=0,0000000). Частота выделения MRSA в многопрофильных стационарах г. Москвы, а также в ряде хирургических клиник ВМА (общая хирургия, абдоминальная хирургия), оказалась достоверно ниже, чем в ожоговом центре г. Оренбурга (Р <0,05).

Таблица 2

Частота выделения метициллинрезистентных S.aureus в стационарах различных регионов РФ

Федеральный округ Город Число стацио-наров Число изолятов S.aureus

изу-чен-ных устойчивых

к оксациллину (%) вариации

числа (%) Oxar

изолятов

Центральный Москва 6 420 127

(25,87*–34,87**)

Поволжский Саратов,

Н. Новгород 2

Северо-Западный Санкт- Петербург 11 575 198

41,86%***

(37,37–46,45) 0,06–80

Уральский Оренбург 1 50 70 70

Сибирский Иркутск 2 160 0 0

Южный Ростов-на -Дону 1 70 0 0

Всего: 7 23 1395 358

(19,68–35,66)

0,06–80

Примечание:* – нижняя граница доверительного интервала к вероятности;

** – верхняя граница доверительного интервала к вероятности;

(доверительная вероятность 0,05).

Анализ источников выделения возбудителя показал, что, MRSA явились причиной нагноений хирургических и ожоговых ран в 37,7%, заболеваний дыхательных путей – 30,1%, включая пневмонию и трахеобронхит, бактериемий – в 19,6% случаев. Другими источниками возбудителя (12,6%) в ряде случаев были ликвор и экссудат брюшной полости (см. рис.1).

Рис. 1. Структура заболеваний, вызванных MRSА.

Примечание: N – число источников возбудителя.

Летальность при заболеваниях, вызванных MRSA, составила в среднем 31,5%, при этом она была значительно выше в группе лиц старше 40 лет (табл.3). В случае присоединения грамотрицательной микрофлоры или патогенных грибов летальность возрастала до 53,3%.

Таблица 3

Исходы заболеваний, вызванных MRSA, у пациентов