Аналогично, как и при приготовлении вакцины против кандидоза.

Аналогично, кандидозной вакцины.

Оценка иммуногенных свойств вакцины. Вакцину вводят кроликам внутримышечно в дозе 2,5 мл двукратно с 8-10-ти дневным интервалом. Напряженный иммунитет наступает через 14 дней после ревакцинации. Учитывая, что в естественных условиях возбудитель аспергиллеза проникает в организм алиментарным путем, поражая при этом органы пищеварительного тракта, оценку напряженности иммунитета проводят с использованием перорального заражения кроликов, вакцинированных по описанной выше схеме. С помощью интрагастрального зонда в желудок кроликов вводят культуру вирулентного штамма A. fumigatus с концентрацией возбудителя 1,0х106спор/см3 и в объеме вводимой суспензии клеток гриба – 10,0 мл.

У невакцинированных животных клинические признаки заболевания (отказ от корма, расстройство пищеварения, явления угнетения нервной системы) проявляются через 3-4 суток после заражения. Гибель интактных кроликов наступает через 3-6 суток после появления первых клинических признаков болезни. У вакцинированных животных клинические симптомы заболевания отсутствуют.

Серологическую оценку гуморального иммунитета проводят также с использованием РП и ИФТС. Кровь для исследований берут от иммунизированных и для контроля от интактных кроликов через 14 суток после ревакцинации. Титр специфических АТ в РП достигает значений 1:8-1:16, в ИФТС - 1:3125.

Получение вакцины против мукороза и оценка ее иммуногенности

Технология приготовления вакцины против мукороза во многом аналогична способу получения противоаспергиллезного препарата. Однако имеются и различия:

1. Используется штамм гриба M. racemosus №195. После культивирования в бульоне Хенкса в течение 12-ти суток «урожай» спор обычно колеблется в пределах 0,5-0,6х106спор/см3.

2, 3, 4, 5 и 6 этапы выполняются аналогично описанным в способе приготовления вакцины против аспергиллеза.

7. Оценку иммуногенных свойств полученного препарата проводят на кроликах. Вакцину вводят внутримышечно двукратно в дозе 2,5 мл. Интервал между введениями 7-10 дней. Напряженный иммунитет наступает через 2 недели после реиммунизации. Контрольное заражение проводят перорально культурой вирулентного штамма M. racemosus c концентрацией спор возбудителя 1,0х106спор/см3 и в объеме вводимой суспензии клеток гриба – 10,0 мл.

У невакцинированных животных клинические признаки заболевания (отказ от корма, диарея, симптомы расстройства в центральной нервной системе и т.д.) проявляются на 5-7 сутки после заражения. Гибель животных на 10-20 сутки после появления признаков заболевания. У вакцинированных животных признаки болезни отсутствуют или проявляются снижением аппетита и быстропроходящей диареей).

Серологическую оценку гуморального иммунитета проводят постановкой только РП из-за отсутствия других методов. РП с сывороткой крови иммунизированных животных достигает значений 1:8 - 1:16, а интактных - не выше 1:4.

Антигены, использованные для конструирования кандидозной, аспергиллезной и мукорозной вакцин были подвергнуты биохимическим исследованиям. Результаты исследований представлены в таблицах 2.2-2.4.

Таблица 2.2.

Характеристика антигенов грибов по липидному составу

№ п.п. Наименование и состав компонентов

Антигены

A. fumigatus №6 M. racemosus №195 C. albicans №253

1. Общее содержание липидов, % 2,24 2,05 0,22

Содержание кислот в % к общим липидам

2. Линолевая кислота 1,50 11,5 2,05

3. Линоленовая кислота 5,31 3,77 5,22

4. Олеиновая кислота 76,8 66,5 76,2

5. Насыщенные кислоты 17,9 14,7 15,8

Таблица 2.3.

Характеристика антигенов грибов по составу углеводов

№ п.п.

Наименование углеводов Антигены

количество углеводов, мг%

A. fumigatus №6 M. racemosus №195 C. albicans №253

1. Моносахариды 0,24 49,1 49,5

2. Дисахариды 1395 1379 14,0

3. Полисахариды н/о н/о 76,0

Таблица 2.4.

Характеристика антигенов грибов по полипептидному составу

№ п.п.

Наименование компонентов

Антигены

A. fumigatus №6

M. racemosus №195