Delist.ru

Нарушения конечного этапа свертывания крови у детей и подростков с синдромом системной мезенхимальной дисплазии (15.09.2007)

Автор: СТУРОВ Виктор Геннадьевич

3. Болезнь / синдром фон Виллебранда 27 11,4

4. Гемофилия А и В 10 4,3

5. Нарушения конечного этапа свертывания крови, в т.ч. 63 26,8

с геморрагическим синдромом

с тромботическим синдромом

из них с дисфибриногенемией 27

12 11,5

ВСЕГО: 235 100,0

Структуризация пациентов группы сравнения представлена в табл.2. Как и основной группы, среди обследованных вновь преобладали мальчики в возрасте от 11 до 17 лет.

Таблица 2

Структура нарушений гемостаза у больных группы сравнения (n=193)

Форма патологии гемостаза Абс. %

1. Наследственные тромбоцитарные дисфункции

2. Синдром и болезнь фон Виллебранда

3. Коагулопатии (гемофилия А и В)

4. Ангиопатии

5. Нарушения конечного этапа свертывания, в т.ч.

с геморрагическим синдромом

с синдромом тромбофилии

Без тромбозов и геморрагий

ВСЕГО: 94

193 48,7

В ходе проведения настоящего исследования обследования было выявлено и проведено комплексное обследование 24 больных с рецидивирующим тромботическими проявлениями СМД – тромбофилическими МД (5,6% от числа пациентов с нарушениями гемостаза и 10,2% - от числа больных с СМД) в возрасте от 14 до 39 лет (средний возраст 17,08(4,5 лет), из них у 16 лиц женского и 8 – мужского пола. В общей когорте обследованных, пациенты с тромбогенными вариантами СМД составили 4,5% случаев и 1,02% среди пациентов с проявлениями мезенхимальной дисплазии. Признаки последней были выявлены у 22 (91,6%) из этих больных, тогда как в группе практически здоровых людей частота проявлений мезенхимальной дисплазии составила не более 14,2% (р<0,001).

Для решения поставленных задач выполнены следующие этапы исследований:

На 1 этапе исследования – из 580 обследованных пациентов с учетом существующих критериев было выделено 235 больных с признаками системной мезенхимальной дисплазии.

На 2 этапе – проведено комплексное клинико-лабораторное обследование, позволившее установить у 423 из них характер нарушений в системе гемостаза, на основании которого пациенты были подразделены на ряд нозологических групп.

На 3 этапе – изучен характер нарушений конечного этапа свертывания крови у пациентов с СМД, выявивший у 41,3% (n=97) качественные (структурные) аномалии фибриногена – дисфибриногенемии.

На 4 этапе – исследовано содержание в плазме 195 больных с СМД фибронектина (FN), определивших характер функционально-биохимических нарушений у пациентов на фоне мезенхимальной дисплазии.

На 5 этапе – проведено исследование молекулярной структуры выделенного фибриногена из плазмы 65 пациентов с различными вариантами СМД с помощью электрофореза в геле полиакриламида.

На 6 этапе – проведено исследование содержание в плазме 195 пациентов ряда эссенциальных биометаллов (Cu2+,Zn2+,Mn2+,Cа2+,Mg2+), позволившее установить характер нарушений биоминерального обмена у пациентов с СМД.

Исследование сосудисто-тромбоцитарного, плазменно-коагуляционного и фибринолитического звеньев системы гемостаза проводились согласно современным методическим рекомендациями З.С. Баркагана, А.П. Момота (2001, 2004).

Методы лабораторной диагностики геморрагического синдрома включали следующие тесты: Активированное парциальное тромбопластиновое время (АПТВ); Протромбиновое время (ПВ) по Quick с тромбопластином, стандартизированным по международному индексу чувствительности (МИЧ 1,1); Эхитоксовый тест (с ядом многочешуйчатой эфы Echis multisquamatus) по Л.П. Цывкиной; Тромбиновое время (ТВ); Анцистродоновый тест (с ядом щитомордника обыкновенного Agkistrodon halys halys) по Л.П. Цывкиной; Определение активности фактора VIII/IX; Эуглобулиновый лизис ядовыми коагулазами по Kowarzik, Buluck; Определение аутополимеризации фибрин-мономеров по Сухановой Г.А.; Уровень растворимого фибрина в плазме – орто-фенантролиновым тестом (ОФТ) по В.А. Елыкомову и А.П. Момоту (1987); XIIа - зависимый лизис эуглобулинов по Г.Ф. Еремину и А.Г. Архипову (1982); Концентрация фибриногена в плазме по Clauss.

Для идентификации тромбофилий использовались следующие методы: Активность антитромбина III (АТ-III); Скрининг нарушений в системе протеина С – по оценке нормализованного отношения (НО); Определение плазменной активности протеина С методом хромогенного субстрата Определение в плазме крови волчаночного антикоагулянта (ВА) с использованием противовесных скрининговых и подтверждающих фосфолипид-зависимых коагуляционных тестов. Уровень плазминогена в плазме определялся методом, основанным на оценке скорости лизиса сгустка из растворимого фибрина; Уровень гомоцистеина (ГЦ) в сыворотке крови иммуноферментным методом с помощью диагностических наборов фирмы AXIS (Норвегия).

Методы исследования тромбоцитарного гемостаза:

Количество тромбоцитов с помощью гематологическая анализатора; Определение агрегационной активности тромбоцитов на агрегометрах: лазерный анализатор микрочастиц «ЛАСКА-Био», НПФ «Люмекс», Санкт-Петербург (Россия), Сhrono Log (USA) под действием индукторов агрегации - АДФ (конечная концентрация 1х10-5М), адреналина (конечная концентрация 10 мкг/мл), тромбина (активностью 1,0-1,5 NIH Ед/мл), растворимого фибрина (концентрация – 2,4 мг/мл), коллагена (концентрация 20 мг/мл), ристомицина (конечная концентрация – 0,17 мкг/мл). Определение доступности 3 пластиночного фактора по каолин-лебетоксовому тесту. Определение адгезивности тромбоцитов к стекловолокну и коллагену, ретракции кровяного сгустка. Определение активности фактора Виллебранда в плазме и тромбоцитах в модификации для лазерного агрегометра «Chrono Log».

Определение уровня фибронектина в плазме крови проводилось на спектрофотометре PM 5010 (Германия) с использованием реактивов ЗАО «Имтек» (Москва. Россия).

Одномерный аппаратный электрофорез фибриногена в полиакриламидном геле (ПАГ) с добавлением суспензии Ацетат-Д-сефарозы при помощи аппарата Quantiscan 1 с использованием и обработкой программным обеспечением (Biosoft, Кембридж, Англия), Мембраны в 25 V, PCR- анализатор, совместимый с PC Pentium 166/1-02.

Определение содержания эссенциальных биометаллов в плазме крови проводилось на атомно-адсорбционном спектрофотометре «Unicam-939» (Англия), их содержание выражалось в мг/л.

Оборудование. Нефелометрический оптический коагулометр «СА-50» «Sysmex» (Япония), Турбодиметрический оптический гемокоагулометр CGL 2110 “Солар” (Беларусь); Лазерный агрегометр «Chrono-Log» (США), лазерный анализатор микрочастиц «ЛАСКА-Био» (НПФ «Люмекс», г. Санкт-Петербург, Россия), совместимый с PC Pentium 166/1-02, лазерно-адсорбционный спектрофотометр «Unicam-939» (Англия), спектрофотометр PM 5010 (Германия).

Реактивы. Фирмы ООО «Технология-Стандарт» (Россия, Барнаул), НПО «Ренам» (Россия, Москва), ООО «Лабораторная диагностика» и ЗАО «Имтек» (Москва. Россия).

загрузка...