Delist.ru

Современные биотехнологический процессы и иммунологические методы при промышленном производстве ветеринарных препаратов (09.01.2008)

Автор: Гринь Светлана Анатольевна

Выход фракций контролировали спектрофотометрически по оптической плотности при длине волны (=280 нм (ОП280) и объединяли фракции с ОП280 больше 1,0. Затем объединенные фракции наносили на DEAE-Toyopearl 650 М, уравновешенный 25 мМ трис-HCI, рН 8,3 (колонка К 26х40).

Выход иммуноглобулина G КРС определяли, исходя из величины ОП280 объединенного элюата, по формуле:

Выход IgG в мг = Vх-------- ,

где V – объем объединенного элюата;

ОП280 – оптическая плотность объединенного элюата;

1,31 – экстинкция раствора Ig G с концентрацией 1 мг/мл.

Выход очищенного иммуноглобулина составил 160 мг/мл. Чистоту препарата Ig G проверяли диск-электрофорезом в полиакриламидном геле – 7,5 % в трис-HCI буфере, рН 8,3.

Однородность и специфичность проверяли иммуноэлектрофорезом в слое 1 % агара «Дифко» на веронал-мединаловом буфере, рН 8,6.

Преципитирующую активность определяли по Оухтерлони. Полученный нами препарат давал полосу преципитации в разведении 1:256-1:512 и выше.

Таким образом, методом ионообменной хроматографии, получен высокоочищенный препарат Ig G КРС, необходимый для последующей гипериммунизации кроликов, с целью получения антисыворотки к Ig G КРС.

2.2.10. Разработка метода определения токсичности масляных адъювантов и их компонентов

При исследовании токсичности различных масляных адъювантов и их компонентов с помощью разработанного нами способа в сравнении со способом с использованием белых мышей, как более близкого к количественному способу оценки токсичности. В результате проведенных исследований получили результаты токсичности различных масел, эмульгаторов и эмульсий, используемых в производстве биопрепаратов, на белых мышах и культуре клеток СП, представленных в таблицах 7-9.

Таблица 7

Токсичность эмульгаторов при исследовании на мышах и культуре клеток в монослое

№ Наименование Результаты оценки на мышах

ТЦД50/мл

пп эмульгатора АПМТ, г

ОПМТ,% на культуре

клеток (lg)

1 Ланолин 6,6±0,4 70,2+4,5 2,1+0,2

2 Сорбитанололеат 6,1+0,3 59,4+3,2 3,4+0,1

3 Монтанид 888 7,1 ±0,4 75,5+4,3 1,6+0,1

4 Монтанид 103 7,3+0,4 77,7+4,3 1,5+0,1

5 Физ. раствор (контроль) 9,4+0,5 100,0±2,0

Таблица 8

Результаты реактогенности масла на мышатах и его токсичность на культуре клеток в монослое

№ пп Наименование

масла Процент отека опытных лап (М+m), n = 5 На культуре кле-ток СП ТЦД50 (lg)

1 2 3 4

1 Вакцинное 83,0+2,0 1,8±0,2

2 Основа РМ 155,0+10,0 3,1+0,3

1 2 3 4

3 Основа АМГ-10 165,0+7,0 3,4+0,3

4 Ангарское 80,0+2,0 1,7+0,2

5 Маркол 52 31,0±4,0 1,1±0,1

Таблица 9

Результаты реактогенности масляных компонентов в опыте на мышах и их токсичность на культуре клеток СП

№ пп Наименование

компонента масло+эмуль-

гатор Соотношение компонентов в адъюванте, % Процент отека опытных лап мышей (М + m, n = 5) ТЦД50 lg

загрузка...