рСО2 35+0,5°С

7,1+0,01

-200мв+10%

60% нас. + 10%

7%нac.+ 10%

Четвертый период Температура

рСО2 35+0,5°С

7,2+0,01

-200мв+10%

60%нас.+10%

7%нас.+ 10%

Кроме того, работы по оптимизации питательных сред на втором периоде и особенно на третьем и четвертом периодах сперматогенеза, осуществляемого нами способом суспензионного культивирования, являются более сложными и требуют дальнейшего изучения.

2.2.4. Культивирование и накопление вирусов бешенства, ИРТ, ПГ-3 при глубинном культивировании в биореакторах

При культивировании вирусов ИРТ, ПГ-3 и бешенства с использованием культур клеток ПТ-80 и ВНК 21/13 в биореакторах по отработанным оптимальным параметрам в отделах вирусологии и молекулярной биологии в 2001-2004 гг. были получены данные, представленные в таблице 4.

Таблица 4

Результаты накопления вирусов при их культивировании

в биореакторах суспензионным способом

Культура

клеток Вирус n Титр в

ИФА lg LD50/мл

ПТ-80 ИРТ 5 1:512 6,9+0,2

ПГ-3 5 1:563 7,4+0,1

ВНК 21/13 бешенства 7 1:512 6,3+0,2

Результаты свидетельствуют о высоком накоплении вирусных антигенов, полученных при культивировании в биореакторах суспензионным способом.

2.2.5. Культивирование пастерелл, гемофилл и стрептококков в биореакторах

В работе использовали производственные штаммы Pasteurella multocida А-1231, В-681 и Д-Т-80, Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae №5870 и ГУ-19, Streptococcus zooepidemicus П-2082 и Streptococcus suis "Касли", Salmonella typhimurium № 415 и Salmonella choleraesuis № 370. Питательные среды для выращивания вакцинных штаммов готовили по действующим инструкциям на монопрепараты, а их выращивание осуществляли по разработанным нами режимам культивирования в лабораторных ферментерах АНКУМ-2М, оснащенных системами автоматического контроля и регулирования основных параметров культивирования (температура, рН, еН и рО2).

В процессе работы культуры пастерелл, гемофильных бактерий и стрептококков исследовали по следующим показателям: морфология, культуральные свойства, оптическая плотность.

Культуры гемофильных бактерий инактивировали формалином в конечной концентрации 0,2% при температуре 18-22°С в течение 5-6 суток и концентрировали до концентрации 20 млрд.м.т/мл методом центрифугирования.

Культивирование пастерелл (P. multocida серовариантов А (шт. 1231), В (шт.681) и Д (шт. Т-80)) проводили реакторным способом на Щелковском биокомбинате в соответствии с режимом, разработанным сотрудниками отдела микробиологии ВНИТИБП.

Штамм P. multocida 115-й, полученный из ВГНКИ, культивировали в усовершенствованной питательной среде на основе перевара Хоттингера (ПХ).

Концентрация культур производственных штаммов по окончании процесса выращивания (10-12 час) была 22 ± 2 млрд.м.т./мл.

Культуры пастерелл инактивировали формалином в конечной концентрации 0,3% при температуре 37°С в течение 24 часов и концентрировали методом центрифугирования на центрифуге ОТР 101 - К1 при q = 12000.

В таблице 5 и на рисунке 1 представлена динамика накопления H.pleuropneumoniae (шт. 5870 и ГУ-19) в процессе культивирования.

Таблица 5

Динамика накопления гемофилъных бактерий в процессе

культивирования (n = 3)

Время культивирования (час) Концентрация микробных клеток млрд.м.т./мл

шт. 5870 шт. ГУ-19

2345678 0,7 ± 0,2 1,0 ±0,1

4,5 ±3,6 7,4 ± 2,0 9,3 ± 0,2