Delist.ru

Современные биотехнологический процессы и иммунологические методы при промышленном производстве ветеринарных препаратов (09.01.2008)

Автор: Гринь Светлана Анатольевна

Экономический эффект расчитывали при промышленном производстве биопрепаратов с учетом способа, описанного в монографии И.В. Тихонова (2007 г.), и расчитанного по методу М.г. Таршиса Т.А. Ломакиной (1991 г.) и составил 12 млн руб. в год.

3. Выводы

Усовершенствованы и разработаны с использованием современного оборудования и технических средств механизации и автоматизации биотехнологические процессы культивирования микроорганизмов, клеток животных и вирусов производства высокоэффективных диагностикумов в ИФА для нужд ветеринарии.

Использование современных автоматизированных биореакторов и методов оптимизации позволило при суспензионном культивировании культур клеток ПТ-80 и ВНК-21/13 получать их в концентрации до 3 млн кл в мл, а при псевдосуспензионном на 1-2 порядка выше.

Использование гибких и блочно-модульных систем культивирования позволяет получать в высоких концентрациях вирусы (бешенство – в титрах 108-9ТЦД50, ИРТ - 108ТЦД50) и микроорганизмы (пастереллы, гемофилы и стрептококки до 20-40 млрд кл в мл).

Использование высокоэффективных методов и аппаратов (жидкостных сепараторов и осадительно-фильтрующих центрифуг на бесприводной основе с высокими технико-экономическими показателям) для разделения, очистки и концентрирования вирусов и микроорганизмов методами сепарирования, центрифугирования, фильтрования и ультроцентрифугирования позволяет получать очищенные специфические антигены при промышленном производстве биопрепаратов (диагностикумы, лечебные сыворотки и др.).

Разработан высокоэффективный способ оценки токсичности масляных адъювантов и других компонентов с использованием первичнотрипсинизированных и перевиваемых культур клеток в 10-100 раз по чувствительности выше, чем с использованием белых мышей, что позволило повысить эффективность биопрепаратов при их применении при промышленном производстве лечебных сывороток и диагностикумов (бешенство, ИРТ, хламидиоз, респираторно-синцитиальная инфекция, ящур, болезнь Марека и другие) в процессе изготовлении гипериммунных сывороток.

Установлено, что наиболее сложным и определяющим является четвертый период сперматогенеза в культуральной системе. С целью создания трансгенных свиней к оптимизации параметров культивирования для получения живых клеток, включая сперматогонии, необходимы дальнейшие исследования.

3.7. Теоретически обосновано и практически подтверждено наличие гепототического объема гибели клеток линии ВНК 21/13 в биореакторах при суспензионном культивировании в зависимости от уровня аэрации, размера пузырьков, силиконового пеногасителя (пропинол Б-400), а также при культивировании на микроносителях и установлена константа гибели клеток, которая в зависимости от времени культивирования колебалась от 2,7х10-6 сек-1 до 22,3х10-6сек-1.

Разработаны методы очистки, инактивации и концентрирования вирусов бешенства и инфекционного ринотрахеита и изучены их биологические свойства, которые сохранялись при получении специфических антигенов, используемых для получения гипериммунных сывороток при промышленном производстве диагностикумов.

Усовершенствованы способы получения и очистки специфических антител и моноклональных антител при промышленной технологии разработки и производства для практического применения диагностикумов.

4. Практические предложения

1.Разработан способ оценки токсичности масляных адъювантов и других компонентов с использованием первичнотрипсинизированных и перевиваемых культур клеток (2002), утвержденный А.М. Смирновым в отделе ветеринарной медицины РАСХН.

2.За период с 2001 по 2007 гг. выпущены для практического применения в АПК России диагностикумы против вирусов ИРТ ИФА – 500, бешенства РДП – 3500, РИФ – 4000 и хламидиоза РСК – 15000 наборов.

3.Разработаны и утверждены:

- Инструкция по изготовлению диагностикума ИФА против вируса ИРТ (2007), утвержденная директором ВНИТИБП.

- Инструкция по изготовлению диагностикума РДП против вируса бешенства (2001), утвержденная директором ВНИТИБП.

- Дополнение к инструкции по изготовлению диагностикума РИФ против вируса бешенства (2004), утвержденная директором ВНИТИБП и согласованная с Руководителем Департамента ветеринарии и директором ВГНКИ.

- Инструкция по изготовлению набора для диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животных в РСК и РДСК (2002), утвержденная директором ВНИТИБП.

- Инструкция по изготовлению ассоциированных лечебных сывороток против пастереллеза, гемофилеза и стрептококкоза свиней (2007), утвержденная директором ВНИТИБП.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Эрнст Л.Н., Моисеева Н.А., Самуйленко С.А. Особенности иммунной системы у трансгенных свиней.// Международная конференция, посвященная 80-летию Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. - Москва.-1999.-с.67.

Эрнст Л.К., Самуйленко С.А., Соловьев Б.В., Самуйленко А.Я. Об использовании клеточных систем поддержания и культивирования сперматогониев in vitro.// Всероссийская научно-практическая конференция «Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов», посвященная 30-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности. – Щелково.-2000.-с.118-119.

Эрнст Л.К., Самуйленко С.А., Зиновьева Н.А. Оценка эффективности использования ретровирусных векторов для переноса генов у сельскохозяйственных животных in vivo.// Всероссийская научно-практическая конференция “Научные основы производства ветеринарных биопрепаратов”, посвященная 30-летию Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности. – Щелково.-2000.-с.119-120.

Самуйленко С.А. Достижения биотехнологии в области создания трансгенных животных.// Всероссийская научно-производственная конференция «Разработка и освоение производства нового поколения лекарственных средств для животных и их применение в ветеринарной практике» в Федеральном государственном унитарном предприятии «Ставропольской биофабрике». – Ставрополь.-2000.-с.63.

Бобровская И.В., Самуйленко С.А. Перспективы использования полимеразной цепной реакции (ПЦР) для типирования вируса болезни Марека.// Международная научно-практическая конференция «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных» во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии. – Покров.-2000.-с.221-224.

Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Гунин М.А., Самуйленко С.А. Исследование гибели клеток в процессе аэрации при глубинном культивировании в биореакторе.// Международная научно-практическая конференция «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных» во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии. – Покров.-2000.-с.199-203.

Эрнст Л.К., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Самуйленко С.А. Культуры микроорганизмов и клеток животных-продуцентов биологически активных веществ.// Международная научная конференция «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» во Всероссийском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной биотехнологии. – Москва.-2000.

Рубан Е.А., Соловьев Б.В., Самуйленко С.А., Самуйленко А.Я., Клюкина В.И. Некоторые проблемы глубинного культивирования клеток животных в биореакторах.// Биологическая научно-практическая конференция ВГНКИ. – Москва. – 2000.

Самуйленко А.Я., Самуйленко С.А., Клюкина В.И., Рубан Е.А. Технология производства генноинженерных вакцин.// Биологическая научно-практическая конференция ВГНКИ. – Москва. – 2000.

Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Скичко Н.Д.. Яковлев А.Е., Самуйленко С.А., Казаков М.А. Получение противоящурных гипериммунных сывороток на использованных морских свинках.// Науковий вiсник Национального аграрного унiверситету. – Киев.-2001.-с. 264-265.

Кузнецов Д.П., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И., Кузнецова С.В., Самуйленко С.А. Тест-система для ранней иммуноферментной диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.// Науковий вiсник Национального аграрного унiверситету. – Киев.-2001.-с.269-271.

Самуйленко С.А., Кузнецов Д.П. Функция лимфоцитов и макрофагов в клеточноопосредованном иммунитете при инфекционном ринотрахеите КРС.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 15-18.

Самуйленко С.А., Бобровская И.В., Кузнецов Д.П. Очистка индивидуальных гликопротеинов вируса инфекционного ринотрахеита с помощью моноклональных антител.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 35-37

Романенко М.Н., Бирюков А.Г., Клюкина В.И., Самуйленко С.А. Современное состояние диагностики и типирования лиссавирусов.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 174-176.

Самуйленко С.А., Бобровская И.В., Кузнецов Д.П. Исследование иммуногенных свойств отдельных гликопротеинов вируса ИРТ КРС.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 38-41.

Романенко М.Н., Клюкина В.И., Бирюков А.Г., Самуйленко С.А. Получение и применение альбумин-родамина конъюгата в диагностике бешенства животных методом флюоресцирующих антител.// Материалы международной конференции молодых ученых. – Щелково.-2001.-с. 50-52.

Яковлев А.Е., Самуйленко С.А., Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Скичко Н.Д., Казаков М.А., Большакова М.В. Получение афтозного материала от морских свинок, зараженных вирусом ящура типов А, О и С.// Материалы международной конференции молодых ученых «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов». – Щелково.-2001.-с. 182-184.

Тетеричев В.И., Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Белоусов В.И., Бирюков А.Г., Самуйленко С.А. Эпизоотическая ситуация по бешенству в Тульской области и смежных областях Российской Федерации.// Материалы международной научно-практической конференции «Нейроинфекции: бешенство, гупкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтфелдта-Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена». – Покров.-2001.-с. 10-14.

Тетеричев В.И., Самуйленко А.Я., Белоусов В.И., Солодилов А.Н., Бирюков А.Г., Самуйленко С.А., Рубан Е.А., Иванов В.С. Современное состояние заболеваемости бешенством домашних и диких животных в Тульской области.// Материалы международной научно-практической конференции «Нейроинфекции: бешенство, гупкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтфелдта-Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена». – Покров.-2001.-с. 14-17.

загрузка...