Delist.ru

Аденилатциклазный сигнальный механизм действия пептидов инсулинового суперсемейства у позвоночных и беспозвоночных (07.09.2007)

Автор: Плеснёва Светлана Александровна

+ инсулин

10-9 М 48.25(2.21

(344 %) 15.92(1.24

(408 % ) 10.24(0.62

(509 %) 14.54(0.82

(171 %)

+ инсулин

10-8 М 19.87(1.44

(142 %) 9.84(0.56

(252 %) 9.92(0.47

(494 %) 19.55(1.13

(238 %)

+ инсулин

10-7 М 17.13(0.98

(122 %) 4.93(0.45

(126 %) 7.51(0.33

(374 %) 22.21(1.37

(261 %)

+ инсулин

10-6 М 17.90(1.12

(128 %) 5.12(0.21

(131 %) 1.95(0.22

(97 %) 24.39(1.62

(286 %)

Изучение АЦ стимулирующего эффекта пептидов инсулинового суперсемейства и ЭФР в онтогенезе позволило выявить следующие факты. Наиболее выраженный АЦ активирующий эффект инсулина (10-11М-10-6М обнаруживается у куриных эмбрионов (10, 13, 16 суток) и цыплят (3 суток) при концентрации гормона 10-9М, и составляет у 10-суточных эмбрионов +244%, у 13-суточных +308%, у 16-суточных +409% (Таблица 3), а у 3-х суточных цыплят (+186%) при более высокой концентрации 10-6М, что может быть связано с переходом эмбрионов в постэмбриональный период, когда процессы роста и дифференцировки заканчиваются.

Проведенные нами исследования действия инсулина и ИФР-1 на активность АЦ в мембранной фракции, выделенной из культуры клеток куриных миобластов (4-й день развития) показали, что наибольший АЦ стимулирующий эффект инсулина (+352%) выявляется при концентрации 10-9М, а ИФР-1 (+289%) при концентрации 10-10М (данные в диссертации).

В мембранной фракции мышц моллюска АЦ стимулирующий эффект инсулина, ИФР-1, ИПП и ЭФР выявляется при концентрациях - 10-11-10-8М (Рис. 9). Инсулин и ИФР-1 оказывают наиболее выраженное стимулирующее действие на активность АЦ при концентрации 10-8М (+63% и +54%, соответственно), а ИПП и ЭФР при 10-9М (+415% и +223%, соответственно).

Рис. 9. Базальная активность АЦ принята за 100 %.

Время действия пептидов – 2.5 мин.

Таким образом, определен диапазон концентраций, при которых проявляется АЦ активирующий эффект исследуемых пептидов. Следует отметить видоспецифичность действия пептидов. Действие ИПП, выделенного из висцеральных ганглиев моллюска A.cygnea, является более эффективным в ткани моллюска и менее эффективным в тканях позвоночных.

Участие ц-АМФ-зависимой ФДЭ в механизме действия пептидов инсулинового суперсемейства

Уровень цАМФ в клетке зависит не только от АЦ – фермента, осуществляющего его синтез, но и от фосфодиэстеразы (ФДЭ) - фермента, обеспечивающего его деградацию. Исследована динамика во времени активности примембранной формы цАМФ-ФДЭ во фракции скелетных мышц кур. Эта изоформа ФДЭ локализована на внутренней стороне мембраны и способна активироваться инсулином (Houslay, 1985). Нами показано, что активность примембранной цАМФ-ФДЭ не изменяется через 2.5 и 5.0 мин после действия инсулина, увеличивается на +115% через 10 мин и на +179% через 20 мин, по сравнению с базальной активностью фермента, принятой за 100% (Таблица 4).

Таблица 4. Влияние инсулина (10-8М) на активность примембранной цАМФ-ФДЭ в скелетных мышц кур в зависимости от времени

Воздействия Активность цАМФ-ФДЭ (нмоль АМФ/мин/мг белка)

2.5 мин 5.0 мин 10.0 мин 20.0 мин

Без инсулина 3.37±0.5

(100%) 3.70±0.33

(100%) 3.56±0.61

(100%) 3.21±0.28

+ инсулин 3.06±0.21

загрузка...