Delist.ru

Молекулярно-генетические маркеры риска генерализованного пародонтита и их применение в диагностике (07.09.2007)

Автор: Николаева Елена Николаевна

Разработать алгоритм диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита, основанный на построении полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом, включающей в качестве предикторов микробиологические и иммуногенетические показатели пациента.

Разработать алгоритм диагностики поражений тканей пародонта, ассоциированных с герпесвирусной инфекцией, на основе комплексной оценки данных иммуноферментного определения антител к вирусам и обнаружения ДНК пародонтопатогенов и вирусов молекулярно-биологическим методом.

Научная новизна

В представленной работе впервые в Российской Федерации:

1) разработан и всесторонне апробирован набор реактивов для молекулярно-генетического выявления ДНК пяти основных пародонтопатогенных бактерий – A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, P. intermedia, B. forsythus и T. denticola;

2) уточнена этиологическая роль перечисленных выше и некоторых других видов микроорганизмов и установлена степень их участия в развитии острого и хронического воспаления тканей пародонта; выявлены маркеры ДНК вирусов герпеса 1 и 2 типов типов, вируса Эпштейна - Барр и цитомегаловирусов в содержимом пародонтальных карманов у больных хроническим генерализованным пародонтитом с помощью полимеразной цепной реакции и изучена относительная частота их выявления;

3) с помощью молекулярно - генетических методов исследований изучена взаимосвязь аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1) и генов IL - 1? и IL - 1? у представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту, с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию генерализованного пародонтита;

4) определена диагностическая ценность факторов и индикаторов риска для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта;

5) определены наиболее значимые диагностические и прогностические критерии осложненного характера течения воспалительного процесса на основании анализа микробиологических и иммуногенетических показателей;

6) разработаны алгоритмы комплексной клинико - лабораторной, иммуногенетической и микробиологической диагностики генерализованного пародонтита, позволяющие обосновать и уточнить этиопатогенетический диагноз заболевания, назначать адекватную антимикробную терапию, направленную на элиминацию патогенов, создать оптимальные условия для последующего хирургического или ортопедического лечения, контролировать стабильность наступившей ремиссии и своевременно прогнозировать возможные рецидивы заболевания.

Практическая значимость

Улучшение квалифицированной помощи пациентам с хроническими воспалительными заболеваниями пародонта за счет более совершенной диагностики и более глубоких теоретических знаний особенностей развития и течения воспалительных процессов в пародонте.

Предложен новый отечественный набор реактивов для диагностики и контроля эффективности лечения воспалительных заболеваний пародонта с использованием молекулярно-генетических методов исследований.

Определен исходный микробиологический статус населения в различных возрастных группах и выявлены группы людей с риском развития воспалительных заболеваний пародонта, что позволяет провести профилактику повторного заражения членов семьи больного. Полученный массив данных может быть использован в качестве контроля для дальнейших исследований данной проблемы.

Установлена взаимосвязь аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1), IL - 1? и IL - 1? у представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту, с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию пародонтита и может быть использована в исследованиях по проблеме “HLA и болезни”.

Разработаны новые критерии на основании микробиологических и иммуногенетических показателей для постановки правильного диагноза и выбора соответствующего способа лечения, получения объективных данных об эффективности проводимого лечения.

Обосновано применение молекулярно - биологических и иммуноферментных методов для диагностики и контроля эффективности лечения герпесвирусной инфекции у больных хроническим генерализованным пародонтитом. Предложен соответствующий диагностический алгоритм.

Положения, выносимые на защиту

Новая отечественная тест - система “Мультидент - 5” позволяет определять ДНК пародонтопатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции и предназначена для использования в диагностике и контроле лечения воспалительных заболеваний пародонта, вызванных анаэробными микробами.

Факторами риска хронического генерализованного пародонтита являются P. gingivalis или комбинации B. forsythus и T. denticola; P. intermedia, B. forsythus и P. gingivalis; P. intermedia, B. forsythus, T. denticola и P. gingivalis; P. intermedia, B. forsythus, T. denticola, P. gingivalis и A. аctinomycetemcomitans.

Индикаторами риска развития и прогрессирования хронического генерализованного пародонтита являются пародонтопатогенные виды бактерий P. intermedia, B. forsythus, T. denticola и A. actinomycetemcomitans; вирусы семейства Herpesviridae: HSV 1 и HSV 2 типа, EBV и CMV, cпецифичность DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 генов HLA класса II.

Аллели генов HLA - DRB1 *01 и HLA - DQA1 *0101 ассоциированы с устойчивостью к различным формам генерализованного пародонтита.

Cпецифичность HLA - DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 являются маркерами риска хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с вирусами семейства Herpesviridae, “протективными” свойствами обладают специфичность HLA - DRB1 *01, аллель локуса DQA1 *0501 и DQB1 *0501.

Предрасположенность к развитию агрессивной формы хронического генерализованного пародонтита у лиц молодого возраста европеоидного происхождения в смешанной популяции г. Москвы ассоциирована с полиморфизмом гена IL - 1?, локализованного в позиции -899, и гена IL - 1? ? в позиции +3953.

Алгоритмы лабораторной диагностики пародонтита на основе статистических моделей (линейной и полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом) включают микробиологические и иммуногенетические показатели риска генерализованного пародонтита.

Алгоритм диагностики поражений тканей пародонта, ассоциированных с герпесвирусной инфекцией, основан на комплексной оценке данных иммуноферментного определения антител к вирусам (определение стадии ГВИ) и обнаружения ДНК пародонтопатогенов и вирусов молекулярно-биологическим методом (окончательный диагноз).

Внедрение результатов исследования

Разработана новая медицинская технология № ФС-2006/043 – У “Диагностика и прогнозирование течения заболеваний пародонта с применением молекулярно-биологических и иммуноферментных систем”.

Результаты исследования внедрены в практику работы кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии; кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников №2 ФУВС, лаборатории молекулярно - биологических исследований НИМСИ и Клинико - диагностического центра ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.

Материалы диссертации используются в процессе обучения студентов, интернов, клинических ординаторов и аспирантов на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и кафедрах стоматологического профиля ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.

Разработан и внедрен в практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ набор реактивов для выявления пяти видов пародонтопатогенов с помощью молекулярно - генетических методов исследований.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: Всероссийской конференции “Профилактика основных стоматологических заболеваний” (г. Москва, 2003); Российско - норвежском симпозиуме “Заболевания пародонта - актуальные проблемы” (г. Москва, 2004); X и XI Российском национальном конгрессе “Человек и лекарство” (г. Москва, 2003, 2004 гг); Втором съезде общества биотехнологов России (г. Москва, 2004); Всероссийском симпозиуме “Актуальные проблемы стоматологии”, Всероссийского конгресса “Современные методы профилактики и лечения заболеваний пародонта” (г. Уфа, 2004); Всероссийской научно-практической конференции - Первого Всероссийского стоматологического форума “Дентал Ревю” (г. Москва, 2004); II Всероссийской научно-практической конференции “Образование, наука и практика в стоматологии” (г. Москва, 2005); Второй и третьей научно-практической конференции “Актуальные проблемы медицинской биотехнологии” (г. Анапа, 2005, 2006); III Всероссийской научно-практической конференции “Образование, наука и практика в стоматологии” (г. Москва, 2006); Четвертом съезде общества биотехнологов России. (Москва, 2006); VIII международном конгрессе МАКМАХ/ASM по антимикробной терапии (г. Москва, 2006); IV Всероссийской научно-практической конференции “Образование, наука и практика в стоматологии” (г. Москва, 2007); совместном совещании кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии, лаборатории молекулярно – биологических исследований и лаборатории иммунологии НИМСИ ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава (протокол № 6 от 18 июня 2007 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликована 51 научная работа, в том числе 12 – в научных изданиях, рекомендованных ВАК МО РФ, учебные пособия – 3, руководство для студентов – 1, методические рекомендации МЗ и СР для врачей – 1; получено положительное решение о выдаче патента РФ на изобретение; зарегистрирована медицинская технология № ФС-2006/043 – У.

Структура и объем диссертации

Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 385 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 94 рисунками и содержит 80 таблиц. Список литературы включает 72 отечественных и 350 иностранных источников.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

В период с 2002 по 2007 годы нами проведено комплексное обследование 684 человек, обратившихся в пародонтологические отделения консультативно-диагностических центров при Московском государственном медико-стоматологическом университете. Из них 122 человека со здоровым пародонтом и 562 больных хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) в стадии обострения, в возрасте от 18 до 72 лет (360 женщин и 324 мужчины) и

загрузка...