Delist.ru

Новые технологии в диагностике и комплексном лечении распространенного гнойного перитонита

Автор: Быков Александр Дмитриевич

1б группа: исследование антибактериальной активности экстракта зубчатки обыкновенной в эксперименте при РГП.

Острый перитонит вызывали внутрибрюшинным введением крысам (n=305) 1 мл 0,2% раствора нитрата серебра. Оценку антибактериальной активности экстракта зубчатки обыкновенной проводили методом двухкратных серийных разведений в жидкой питательной среде (Першин Г.Н., 1971). Готовились серийные разведения фитоэкстракта с концентрациями от 50,0 до 0,78 мг/мл. В качестве тест-объектов использовали музейные культуры условно-патогенных бактерий: Escherichia coli 408 Новгородская, Staphylococcus aureus 209P, Proteus vulgaris H50, Streptococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa АТСС 10145, полученные из ГИСК им. Л.А. Тарасевича (Москва). Из суточных культур бактерий, выращенных на косяках с мясопептонным агаром, готовили по стандарту мутности рабочую суспензию в физиологическом растворе с титром 109 клеток в 1 мл. Микробная нагрузка для каждой культуры и для каждого варианта опыта составляла 250 тыс. клеток в 1 мл. Бактерии с различными концентрациями препарата выращивали в термостате при 37?С в течение 18–24 часов. Контролем служили пробирки со средой без препарата, куда также вносили суспензию бактерий.

1в группа: влияние экстракта зубчатки обыкновенной на сосудистую проницаемость.

Эксперимент проведен на 14 белых беспородных крысах обоего пола массой 160–180 г. Перитонит вызывали внутрибрюшинным введением уксусной кислоты. Испытуемый фитоэкстракт в дозе 100 мг/кг массы животного вводили за 1 час до исследования, животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в объёме 1 мл на 100 г массы крысы. Через 1 час после инъекции уксусной кислоты и введения метиленового синего определяли степень проницаемости сосудов брюшной полости по интенсивности окраски перитонеального экссудата фотоколориметрическим методом при длине волны 540 нм.

Вторая серия. Применение дренажа из полупроницаемой мембраны при распространённом гнойном перитоните в эксперименте.

2 МДСК (ОГ) группа – основная группа испытуемых животных, где устанавливали МДСК в брюшную полость после моделирования перитонита и укладывали конструкцию между петлями тонкой кишки.

?????????±?p

??%???????????????

??????±T???

&чинали тотчас после введения бактериально-изотопного комплекса в полость брюшины животного с индуцированным перфоративным перитонитом. Эвтаназию животного проводили через 6 часов после контаминации брюшной полости БИК, введением запредельных доз тиопентала-натрия (5 мг/кг).

В эксперименте использованы беспородные собаки (n=12), массой 6–7 кг, длинной тела 60–70 см. Возраст животных – свыше 1 года. В качестве меченного радиопрепаратом патогена использована E. сoli, штамм О151. Маркировка бактерии 99mTc пертехнетатом в дозе 120 (Ci выполнялась по оригинальной методике, разработанной в НЦ РВХ ВСНЦ СО РАМН (заявка на изобретение М. кл. 6 А61 В6/00 № 96122238/14 (028770) от 16 ноября 1996 г.). В качестве мембраны для дренажной композиции использована целлофановая упаковка, применяемая в пищевой промышленности (ГОСТ - 7730-63).

Компонентами сорбционной композиции являлись сухая плазма в дозе 15 г/кг массы тела, гентамицина сульфат 10 мг/кг, физиологический раствор 15 мл/кг.

Расчет размеров мембранного дренажа проводили, исходя из площади брюшинного покрова собаки, по формуле Драбкина, с поправкой Е.В. Гублера и соавт. (1973). В обеих экспериментальных группах, проводили видовую идентификацию микробных тел в содержимом МДСК на автоматическом анализаторе «Autosceptor» («Becton-Dickinson», США). Полученные материалы помещали в вакуумные флаконы, далее осуществляли пересев на твердые среды (кровяной агар, анаэробный кровяной агар) не позже 6 часов с момента забора материала. Чашки для определения аэробных культур инкубировались при температуре 37(С в течение 18–24 часов. Для идентификации анаэробных культур инкубировали среды в анаэростате в течение 42 часов. После инкубирования готовили бактериальную взвесь в соответствующих бульонах. Приготовленный раствор разливали по 100 мкл в стандартные планшеты. Планшеты помещали в камеру автоматического анализатора.

Для радиометрии образцы помещали в стерильные пробирки с последующим измерением уровня радиоактивности дозкалибратором колодезного типа CRS-5 («Capintec inc.», США).

Сцинтиграфию выполняли на гамма-камере Multispect с системой обработки данных Icon («Siemens», Германия) в динамическом режиме с длительностью фрейма 1 минута на протяжении 1 часа эксперимента и 2 минуты в течение последующих 5 часов опыта. Животное фиксировали на препаровочном столике Сеченова в лежачем положении на спине. Выполняли подсчет количества сцинтилляций в секунду на участке в форме квадрата площадью 0,25 см2 в проекциях правого и левого поддиафрагмальных пространств, левого и правого латеральных каналов, малого таза, щитовидной железы, средостения, МДСК.

Радиометрический контроль перфузии мышечной ткани осуществляли подсчетом количества сцинтилляций в секунду на участке передней конечности животного площадью 0,25 см2. На 365 минуте эксперимента, после извлечения из брюшной полости МДСК, проводили дополнительное сканирование животного в течение 2 минут. Определяли уровень радиоактивности в проекции предшествующего размещения дренажной конструкции.

Третья серия. Исследование эффективности наложения кишечных швов в условиях перитонита в эксперименте.

3а-ОГ (n=6) Моделирования перитонита методом перфорации 12-перстной кишки (по Будашееву В.П., 2005) с применением атравматичного шовного материала (основная группа)

3а-ГК (n=6) Моделирование перитонита методом перфорации 12- перстной кишки с применением травматичного шовного материала (группа клинического сравнения).

3б-ОГ (n=6) Моделирования перитонита методом перфорации тонкой кишки с анастомозом «конец» в «бок» и энтеростомией с ТМА атравматичными нитями «Джонсон и Джонсон» викрил - 4/0 (основная группа).

3б-ГК (n=6) Моделирование перитонита методом перфорации тонкой кишки, резекция тонкой кишки с анастомозом «конец» в «конец» атравматичными нитями «Джонсон и Джонсон» викрил - 4/0 (группа клинического сравнения).

Использованы беспородные собаки (n=24), массой 6-8 кг, длиной тела 60-80 см. Возраст животных - свыше 1 года. Под общим обезболиванием (в/в введением калипсола в дозе 4 мг/кг) выполняли лапаротомию.

В 3а-ОГ и 3а-ГК группах перфорировали участок двенадцатиперстной кишки. Операционную рану ушивали послойно, наглухо. Животное укладывали в физиологическое положение без дополнительной фиксации. Через 12 часов проводили релапаротомию, санацию брюшной полости, экстирпацию двенадцатиперстной кишки. Затем выполняли имплантацию БДС в тонкую кишку с применением шовного материала фирмы Джонсон и Джонсон 4/0-5/0 в основной, капрона и х/б нитей в контрольной группах. Операцию завершали наложением асептической повязки.

В 3б-ОГ и 3б-ГК группах перфорировали участок тонкой кишки. Через 12 часов проводили релапаротомию, санацию брюшной полости, экстирпацию двенадцатиперстной кишки. Затем выполняли имплантацию БДС в тонкую кишку с применением шовного материала фирмы Джонсон и Джонсон 4/0-5/0 в основной, капрона и х/б нитей в контрольной группах. Операционную рану ушивали послойно, наглухо. Однорядный анастомоз формировали швами Пирогова – Матешука (n=9). Двухрядный узловой шов (n=15) формировали по методике Czerny: первый ряд – швы через все слои кишечной стенки, второй ? узловые серозно-мышечные швы Ламберта. Резецированные участки кишки направлялись на гистологическое исследование. Выпот из брюшной полости подвергался бактериологическому исследованию. В послеоперационном периоде животным обеих групп проводили инфузионную, антибактериальную терапию, внутрибрюшное введение антибиотиков через дренажную трубку в малый таз.

В основной и контрольной группах резецировали участок двенадцатиперстной кишки с перфорацией. Препарат фиксировали в 10% нейтральном формалине. Для исследования брали 3–4 участка из стенки кишки в месте перфорации. Всего изготовлено 38 гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином по Ван-Гизону. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, гематоксилином и пикрофуксином. Срезы исследовались в микроскопе Olympus CN 20. Метод исследования световая микроскопия с масляной иммерсией.

Для бактериологического исследования выпот из брюшной полости в основной и контрольной группах животных помещали в пробирки с виноградно-сахарным бульоном; пересев на твёрдые среды (желточно-солевой агар) осуществляли стандартной петлёй методом секторных посевов (метод Gould в модификации Рябинского-Родомана) не позже 6 часов с момента забора материала. Чашки инкубировали при температуре 37? С в течении 18–20 часов, после чего подсчитывали число колоний, выросших в разных секторах. Количество бактерий в 1 мл определяли по таблице (Острин П.И. и соавт., 1985).

Статистическая обработка полученных данных

Значения параметрических показателей приведены в их среднем значении (медиана) со средней квадратической ошибкой (m). Значимость различий количественных данных в сравниваемых группах вычисляли по критерию Манна-Уитни. Значимость различий летальности и частот осложнений определяли с помощью точного метода Фишера (Бащинский С.Е., 1997). Рассчитывали параметры клинической эффективности в соответствии с рекомендациями CONSORT (CONSORT Group, 1996).

Результаты исследований и их обсуждение

Саногенные эффекты и клиническая эффективность экстракта зубчатки

обыкновенной

Влияние экстракта зубчатки обыкновенной на экссудацию и дегрануляцию тучных клеток при остром перитоните у белых крыс представлено в таблице 2.

Таблица 2

Сравнительная характеристика групп исследования

Группы Объём внутрибрюшинной

жидкости, (мл.) Дегрануляция тучных

клеток, (%)

Контрольная n=7 1,8 ± 0,12 83,3 ± 2,43

ЭЗО n=7 0,7 ± 0,05* 30,2 ± 3,36*

Калефлон n=7 0,9 ± 0,09* 48,3 ± 5,76*

загрузка...